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部分常见的高分子类型高效反相色谱填料


高分子类型高效反相色谱填料都可以在广泛的pH值(2-12,甚至1-14)范围内使用。从化学结构来看,树脂表面均有较强疏水作用,在乙腈-水或甲醇-水溶液的典型反相色谱淋洗条件下,其色谱性能基本上类似于硅胶基质的烷基键合相填料。
对于多孔结构填料的使用,应根据被分离样品的分子量大小来选择合适孔径的填料。以多孔型的TSKgelPhenyl-5PWRP和Qc-tadecyl4PW两种反相填料为例,前者适合于分离分子量大于10000的大分子化合物,而后者则对分子量小于10000的较小分子化合物是适宜的。同样情况,如果选择PLRP-S填料来分离肽类和蛋白质的话,那么孔径为10nm的填料,大概对于15-20个氨基酸长度的肽类是合适的,孔径为30nm的填料,对于中等分子量的球形蛋白质是适合的;孔径为100unm的填料,对于较大的球状蛋白质或那些纤维状结构的化合物是适宜的;而孔径为400nm的超大孔填料,则可分离很大分子量的物质。
在高效的反相色谱填料中,以SOURCE15RPC、30RPC和POROSR、C18两类树脂的性能最为优异。它们均有很高的负载量,均可在很高流速下使用,而且操作压力都很低,对于快速高效高分辨的分离复杂生物大分子尤为适宜。表示POROOSR/H填充柱,在高流速的梯度淋洗条件下,分别对于蛋白质混合物和血管紧张肽组分(后者在碱性淋洗体系中)的分离结果。

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