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色譜柱的清洗和再生方法
日期：2024-05-08 23:29
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摘要：
色譜柱的清洗和再生方法
除非特殊說明，在所有情況下，所用溶劑的體積應該是色譜柱體積的40-60倍。
應在清洗過程開始和結束時各測一次柱效和容量因子等，比較色譜柱性能的改善，以確定清洗的效果。
確保色譜柱中冇有樣品和緩衝溶液，清洗前所用的溶劑應與*初清洗時所用的溶劑相溶。
應確保實驗測試時所用的流動相與色譜柱中*後的溶劑相溶。
1正相填料
用四氫呋喃衝洗。
用甲醇衝洗。
用四氫呋喃衝洗。
二氯甲烷衝洗。
用無苯正己烷衝洗。
2反相填料
用HPLC級水衝洗，衝洗時進4等份的200μl的二甲亞碸（DMSO）。
用甲醇衝洗。
用氯仿衝洗。
用甲醇衝洗。
3陰離子交換填料
用HPLC級水衝洗。
用甲醇衝洗。
用氯仿衝洗。
4陽離子交換填料
用HPLC級水衝洗；在衝洗的過程中進4等份200μl的DMSO
四氫呋喃衝洗。
5蛋白質凝膠過濾填料
去除蛋白質尺寸排阻介質中的汙染物有兩種清洗/再生的方法。
弱保留蛋白質
用30moL/L pH3.0磷酸鹽緩衝液衝洗。
強保留蛋白質
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四種再生的方法，選用哪一種方法依賴於被分析物和所用的溶劑。
酸堿再生
適合於使用極性流動相分析離子類分析物。
將色譜柱倒裝
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速衝冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速衝冼。
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速衝冼。
用95%甲醇水溶液衝洗重新平衡。
將色譜柱改為正向。
應在清洗過程開始和結束時各測一次柱效和容量因子等，比較色譜柱性能的改善，以確定清洗的效果。
確保色譜柱中冇有樣品和緩衝溶液，清洗前所用的溶劑應與*初清洗時所用的溶劑相溶。
應確保實驗測試時所用的流動相與色譜柱中*後的溶劑相溶。
1正相填料
用四氫呋喃衝洗。
用甲醇衝洗。
用四氫呋喃衝洗。
二氯甲烷衝洗。
用無苯正己烷衝洗。
2反相填料
用HPLC級水衝洗，衝洗時進4等份的200μl的二甲亞碸（DMSO）。
用甲醇衝洗。
用氯仿衝洗。
用甲醇衝洗。
3陰離子交換填料
用HPLC級水衝洗。
用甲醇衝洗。
用氯仿衝洗。
4陽離子交換填料
用HPLC級水衝洗；在衝洗的過程中進4等份200μl的DMSO
四氫呋喃衝洗。
5蛋白質凝膠過濾填料
去除蛋白質尺寸排阻介質中的汙染物有兩種清洗/再生的方法。
弱保留蛋白質
用30moL/L pH3.0磷酸鹽緩衝液衝洗。
強保留蛋白質
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四種再生的方法，選用哪一種方法依賴於被分析物和所用的溶劑。
酸堿再生
適合於使用極性流動相分析離子類分析物。
將色譜柱倒裝
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速衝冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速衝冼。
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氫呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速衝冼。
用95%甲醇水溶液衝洗重新平衡。
將色譜柱改為正向。
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