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凝膠色譜柱的使用方法


凝膠色譜柱的使用方法大體有一下步驟:
(1)預處理稱取葡聚糖凝膠(有不同型號)若干克,加入洗脫劑(通常為甲醇或者水,這里以甲醇為例)約20倍凝膠量,置室溫下3h進行溶脹,溶脹必須徹底,否則會使上柱后流速變慢,凝膠斷裂等。
(2)裝柱凝膠層析柱的直徑與柱長之比一般為1:15。柱的底部用裝有細玻璃管的橡皮塞塞緊,用洗凈的玻璃絲(約200目尼龍布)墊底或購買類似規格的商品柱。然后將柱垂直安裝好,接著將溶脹好的凝膠邊攪勻邊緩緩連續裝入,色譜柱的出口流速m維持在5~10ml/min。凝膠顆粒沉積到柱底后關緊色譜柱,等沉降到1-2cm時再2打開色譜柱。直至降到滿意高度為止,等凝膠柱內的液體留的與凝膠高度差不多時,用較小的濾紙蓋住凝膠床表面,再用洗脫劑洗脫過夜。裝柱后的凝膠必須均勻,不能有氣泡或明顯條紋。否則,必須到出重裝。
(3)加樣裝好的色譜柱至少要用相當于3倍保留體積的洗脫劑平衡,待洗脫劑流至與凝膠柱液面相平時(不能流干,否則會帶入氣泡),用滴管吸取樣品溶液,在高于凝膠表面約1cm處,沿管壁四周緩緩滴加樣品液,加完后打開下面的出口,使樣品滲入凝膠內。再關閉出口,用少量洗脫液將管壁殘留的樣品洗下,再打開出口,至溶液滲入柱內,再關閉出口。可以考慮再加一層薄薄的脫脂棉以保護柱表面(我一般不加),然后即可進行洗脫。
(4)洗脫與收集洗脫時,用甲醇作洗脫劑,并且要連續不斷地進行,使凝膠柱上端保持一定的液層,防止凝膠柱表面的液體流干。一般酸性洗脫劑中堿性物質容易洗脫,堿性洗脫劑中酸性物質容易洗脫。多糖類物質等極性大的物質考慮用水洗脫,常用的洗脫劑是水-甲醇,水-乙醇,水-丙酮等,一般根據自己樣品的性質選擇洗脫液,洗脫液可一直用單一梯度。凝膠色譜的共性是流速慢,每份一般體積較小。(內徑1.3cm左右,長80cm左右的柱子我一般每份收集液為8ml)
(5)凝膠的再生和回收凝膠柱多次使用后,若污染嚴重,則考慮用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl混合液浸泡后,再用水洗凈即可。

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