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親和色譜柱的一般流程

日期:2024-04-29 10:02
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摘要:
      親和色譜柱也稱為親和層析,是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜柱在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子,並且它們的結合是可逆的,在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去處或減少混合物中某一分子的含量。

      將一對能可逆結合和解離生物分子的一方作為配基(也稱為配體),與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯、製成專一的親和吸附劑,再用此親和吸附劑填充色譜柱,當含有被分離物質的混合物隨著流動相流經親和色譜柱時,親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結合的物質,而其他的蛋白質及雜質不被吸附,從色譜柱中流出,使用適當的緩衝液使被分離物質與配基解吸附,即可獲得純化的目的產物。

一般流程

      親和色譜柱分離的通常是混合在溶液中的物質,比如細胞內容物、培養基或血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時被固定相或介質上的基團捕獲,而溶液中其他的物質可以順利通過色譜柱。然後把固態的基質取出後洗脫,目標分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子,那麼隻要分子能與介質結合即可,可以不必進行洗脫(這裡有冇有什麼問題呢?如果不進行洗脫的話,柱子不能再生,冇有實際應用價值吧,柱子多貴)。

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