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凝膠色譜柱操作
日期：2024-05-08 17:26
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摘要：
1、 溶脹
商品凝膠是乾燥的顆粒，通常以40~63um的使用*多。凝膠使用前需要在洗脫液中充分溶漲一至數天，如在沸水浴中將濕凝膠逐漸升溫到近沸，則溶漲時間可以縮短到1~2小時。凝膠的溶漲一定要完全，否則會導致色譜柱的不均勻。熱溶漲法還可以殺死凝膠中產生的**、脫掉凝膠中的氣泡。
2、 裝柱
由於凝膠的分離是靠篩分作用，所以凝膠的填充要求很高，必須要使整個填充柱非常均勻，否則必須重填。凝膠在裝柱前，可用水浮選法去除凝膠中的單體、粉末及雜質，並可用真空泵抽氣排出凝膠中的氣泡。*好購買商品中的玻璃或有機玻璃的凝膠空柱，在柱的兩端皆有平整的篩網或篩板。將柱垂直固定，加入少量流動相以排除柱中底端的氣泡，在加入一些流動相於柱中約1/4的高度。柱頂部連接一個漏鬥，頸直徑約為柱頸的一半，然後在攪拌下、緩慢的、均勻地、連續地加入已經脫氣的凝膠懸浮液，同時打開色譜柱的毛細管出口，維持適當的流速，凝膠顆粒將逐層水平式上升，在柱中均勻地沉積，直到所需高度位置。*後拆除漏鬥，用較小的濾紙片輕輕蓋住凝膠床的表麵，再用大量洗脫劑將凝膠床洗滌一段時間。
3、 柱均勻性檢查
凝膠色譜的分離效果主要決定於色譜柱裝填得是否均勻，在對樣品進行分離之前，對色譜柱必須進行是否均勻的檢查。由於凝膠在色譜柱中是半透明的，檢查方法可在柱旁放一至於柱平行的日光燈，用肉眼觀察柱內是否有“紋路”或氣泡。也可向色譜柱內加入有色大分子等，加入物質的分子量應在凝膠柱的分離範圍，如果觀察到柱內譜帶窄、均勻、平整，即說明色譜柱性能良好；如果色帶出現不規則、雜亂、很寬時必須重新裝填凝膠柱。
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